Evaluación del pico de melting en una qPCR multiplex con SYBR Green I para la identificación de patotipos de Escherichia coli diarreogénicas

Abstract

Las infecciones por Escherichia coli diarreogénicas siguen siendo un problema de salud pública en contextos con limitaciones sanitarias, con más de 2.8 millones de casos de infecciones a nivel mundial a partir de 2014. Frente a ello, la qPCR multiplex con SYBR Green I y el análisis de pico de melting surgen como una alternativa diagnóstica accesible, sensible y capaz de detectar múltiples genes de virulencia en una sola reacción. El objetivo del estudio fue evaluar la utilidad del pico de melting en una qPCR multiplex con SYBR Green I para identificar patotipos de Escherichia coli diarreogénicas. Se analizaron seis cepas clínicas mediante qPCR multiplex, bajo condiciones estandarizadas. Se emplearon controles positivos para ocho genes de virulencia y controles negativos con agua grado PCR y bacterias inactivadas. Los productos amplificados se evaluaron por su temperatura de melting, y los datos térmicos se procesaron en el software CFX Manager y RStudio. Los controles negativos no mostraron fluorescencia, lo que confirmó la especificidad del SYBR Green I. Los controles positivos generaron Tm diferenciables por gen, organizados térmicamente en tres grupos. Las muestras clínicas presentaron perfiles de disociación consistentes con los genes de referencia, lo que permitió identificar infecciones simples y coinfecciones sin señales inespecíficas. También se halló una correlación positiva significativa entre el tamaño del amplicón y su Tm. Se concluye que el análisis de pico de melting en qPCR multiplex con SYBR Green I permite identificar de forma específica y eficiente los patotipos de Escherichia coli diarreogénicas.