Estandarización de cultivo de células mononucleares a partir de un aspirado de médula ósea en pacientes con leucemia linfoblástica aguda

Abstract

Objetivo: Estandarizar un protocolo de cultivo de células mononucleares a partir de un aspirado de médula ósea en pacientes con Leucemia Linfoblástica Aguda. Metodología: La investigación se desarrolló con un enfoque cuantitativo y nivel explicativo, utilizando muestras de células mononucleares obtenidas de aspirados de médula ósea de 13 pacientes diagnosticados con Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA) en el Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas (INEN). Todas las muestras fueron recolectadas bajo consentimiento informado y con la aprobación del comité de ética. El material biológico fue transportado en tubos con Heparina de Litio bajo condiciones controladas y procesado en una Cabina de Bioseguridad Nivel II. El aislamiento celular se realizó mediante protocolos estandarizados, empleando Histopaque. Las células fueron posteriormente lavadas y resuspendidas en PBS 1X y RPMI. El recuento celular y la viabilidad se evaluaron por métodos manuales (cámara de Neubauer) y automáticos (Countess II FL). Para el cultivo celular, las muestras se mantuvieron en incubadora de CO₂, en medio RPMI suplementado con Suero Fetal Bovino, HEPES y antibióticos. Se realizaron recuentos y evaluaciones de viabilidad a las 0, 24 y 48 horas, ajustando las condiciones con transferencias a medio fresco. Transcurridas 48 horas, las células fueron criopreservadas bajo protocolos estandarizados para su conservación y uso en futuras investigaciones. Finalmente, los datos obtenidos fueron documentados mediante registro fotográfico y analizados estadísticamente con el software Stata 18.0. Resultados: Los resultados demostraron que la concentración celular aumentó significativamente en todos los casos, alcanzando valores que oscilaron entre 3.19 x 10^10 y 8.72 x 10^11 células/mL, mientras que la viabilidad se mantuvo por encima del 97%, llegando hasta 99.9%. La implementación cuidadosa en las técnicas de centrifugación y resuspensión, velocidades, contribuyó a minimizar la autofagia y a mantener la integridad celular. Conclusiones: Se optimizaron las condiciones de aislamiento y cultivo celular, logrando mayor viabilidad y rendimiento. El protocolo asegura un adecuado manejo de muestras, homogenización y control en separación y recuento, favoreciendo la supervivencia y proliferación celular.